Ыдысты бөлме температурасында 2-3 минут инкубациялаңыз. Қатты жабысқан жасушаларды 37 °C температурада тез ажыратуға болады. Жасушаларды микроскоппен бақылаңыз. Бөлінген жасушалар микроскопта дөңгеленген және сынғыш болып көрінеді.
Жасушаларды тым ұзақ трипсизацияласаңыз не болады?
Трипсин концентрациясы тым жоғары жасушаларды тым ұзақ уақыт бойы инкубациялау жасушалық мембраналарды зақымдайды және жасушаларды өлтіреді. Қолданылатын трипсин концентрациясына сенімді болмасаңыз, төмен концентрациясын пайдаланыңыз.
Жасушаларды қалай трипсизациялауға болады?
Күйінділерді бөлу үшін жасушалық суспензияны абайлап тамызу арқылы жасушаларды қайта суспензиялауға болады. Қажет болса, жасушаларды санау және/немесе субкультуралау үшін қосымша сұйылтуды жасауға болады.
Ұяшықтар қанша уақытта бекітіледі?
бірінші ұяшықтар 3-5 мин кейін бекітіледі! Менің тәжірибемде көптеген EC 10-20 минуттан кейін бекітілді. Бірақ неғұрлым ұзақ күтсеңіз, тіркеме соғұрлым берік болады.
Жасушаларды екі күн қатарынан трипсизациялау зиянды ма?
Иә, егер сіз жасушаларды 24 сағат бөлінгеннен кейін үздіксіз трипсинизациялап жатсаңыз, бұл зиянды. Бөлуді 48 сағаттан кейін жасаған жөн. … Морфологиясы жақсы болғанша ұяшықтарды сақтай аласыз (Бұл сіздің жасуша түріне байланысты, кейбір ұяшықтар 80 өтуге, ал кейбіреулері 10-ға дейін өтуі мүмкін).
