Жасушалар бөлінгеннен кейін трипсинді инактивациялау үшін алдын ала қыздырылған толық өсу ортасының 2 томын қосыңыз. >95% жасушалардың қалпына келуін қамтамасыз ету үшін ұяшық қабатының бетіне бірнеше рет тамшуыр арқылы ортаны ақырын таратыңыз.
Трипсин белсенділігін қалай тоқтатуға болады?
Трипсиннің қорытылуын мұздату немесе құмырсқа, сірке немесе трифторсірке қышқылын қосу арқылы реакцияның рН мәнін рН 4-тен төмен түсіру арқылы тоқтатуға болады (трипсин сіңген кезде белсенділік қалпына келеді. pH рН 4-тен жоғары көтеріледі). Ас қорытылған үлгілерді -20°C температурада сақтауға болады.
Трипсинді не бейтараптандырады?
Буфер құрамында кальций және магний иондары да трипсин белсенділігін бәсеңдетеді. FBS - трипсин белсенділігін тежеудің тиімді әдісі.
Сарысу трипсинді инактивациялайды ма?
Сарысу бүйректің ферментативті қорытылуынан қалған қалдық трипсинді және кейіннен жасушалар синтездеген протеолитикалық ферменттерді белсендірмейді. Қалдық трипсинді кетіру үшін қайта-қайта жуылған жағдайда жаңа трипсинделген жасушаларды сарысусыз моноқабаттарға дейін өсіруге болады.
Трипсинді өшіру үшін қанша медиа қажет?
Сіз кем дегенде 1:1 қатынасында 5-10% сарысуды құрамында трипсинмен бірге ортаны пайдаланған кезде жеткілікті тежеу болуы керек, содан кейін центрифугалау керек. және жаңа ортамен алмасу.
