Біріншіден, EcoR1 де, Xba1 де ДНҚ-ны қорытқанда (Nde1 сияқты) 5' саңылау қалдырады. Екі жағдайда да 3' ұшы ойық болады, сондықтан полиэрмаза негіздерді қоса алады. Екіншіден, барлық полимеразалар тек 3' ұшына негіз қоса алады, сондықтан Klenow екі учаскенің де шегінген 3' ұшына 4 негіз қосады доғал ұштарды жасайды.
Реттеу ферменттері 5 фосфат қалдыра ма?
Реттеу ферменттерімен қорытылатын векторлар мен кірістірулерде қажетті терминалдық модификациялар (5' фосфат және 3' гидроксил), ал полимеразды тізбекті реакция (ПТР) арқылы жасалған фрагменттерде болмауы мүмкін.
Тұйық ұштарды байлау мүмкін бе?
Тұқымсыз ұшты байлау
Шығыңқы ұштарды байланыстыру негізді жұптастыруды қамтымайды, сондықтан кез келген доғал ұшты басқа доғал ұшымен байланыстыруға болады. Доғал ұштарды SmaI және EcoRV сияқты шектеу ферменттері тудыруы мүмкін.
Taq полимеразасы доғал ұштарды шығарады ма?
Иә… Так Полимераза ПТР-да соңғы ұзарту қадамын 72 dC деңгейінде сақтасаңыз, A-шығуларды қосады. Көбінесе TA клондау үшін пайдаланылады.
ДНҚ секвенирлеуде Кленов фрагментін не үшін пайдалану керек?
Кленов фрагменті зерттеуге негізделген тапсырмалар үшін өте пайдалы, мысалы: Бір тізбекті үлгілерден қос тізбекті ДНҚ синтезі . 5' үстіңгі саңылауды доғал ету үшін ДНҚ фрагменттерінің 3' ұштарын толтыру . Шығыңқы 3' саңылауларды сіңіру.
